लुइगी रिकियार्डी 1 , रोजा माज़ेयो 2,* ©, एंजेलो रायffएले मार्कोट्रिगियानो 1 , गुग्लील्मो रैनाल्डी 3 , पाओलो इओविएनो 4 , वीटो ज़ोनो 1 , स्टेफ़ानो पवन 1 © और कॉन्सेटा लोटि 2,*
- 1 मृदा, पादप और खाद्य विज्ञान विभाग, पादप आनुवंशिकी और प्रजनन इकाई बारी विश्वविद्यालय, अमेंडोला 165/ए, 70125 बारी, इटली के माध्यम से; luigi.ricciardi@uniba.it (एलआर);Angelo.marcotrigiano@uniba.it (बाजू); vito.zonno@uniba.it (वीजेड); stefano.pavan@uniba.it (एसपी)
- 2 कृषि, खाद्य और पर्यावरण विज्ञान विभाग, फोगिया विश्वविद्यालय, नेपोली 25, 71122 फोगिया, इटली के माध्यम से
- 3 बायोसाइंसेज, बायोटेक्नोलॉजीज और बायोफर्मासिटिकल विभाग, बारी विश्वविद्यालय, ओराबोना 4, 70125 बारी, इटली के माध्यम से; guglielmo.rainaldi@uniba.it
- 4 ऊर्जा प्रौद्योगिकी विभाग, बायोएनेर्जी, बायोरिफाइनरी और हरित रसायन विभाग, ईएनईए ट्रिसिया रिसर्च सेंटर, एसएस 106 आयोनिका, किमी 419+500, 75026 रोटोंडेला (एमटी), इटली; paolo.iovieno@enea.it
* पत्र - व्यवहार: rosa.mazzeo@unifg.it (आरएम); कॉनसेटा.लॉटी@unifg.it (सीएल)
सार:
प्याज (एलियम सेपा एल.) दुनिया भर में दूसरी सबसे महत्वपूर्ण सब्जी फसल है और इसके स्वास्थ्य लाभों के लिए व्यापक रूप से सराहना की जाती है। इसके महत्वपूर्ण आर्थिक महत्व और कार्यात्मक भोजन के रूप में इसके मूल्य के बावजूद, इसकी आनुवंशिक विविधता के संबंध में प्याज की खराब जांच की गई है। इस प्रकार, हमने "एक्वाविवा लाल प्याज" (एआरओ) में आनुवंशिक भिन्नता का सर्वेक्षण किया, जो बारी (अपुलिया, इटली के दक्षिणी) प्रांत के एक छोटे से शहर में खेती के एक सदी पुराने इतिहास के साथ एक भूमि है। 11 एआरओ आबादी और तीन सामान्य व्यावसायिक प्रकारों से युक्त जर्मप्लाज्म संग्रह में आनुवंशिक भिन्नता का पता लगाने के लिए 13 माइक्रोसेटेलाइट मार्करों के एक सेट का उपयोग किया गया था। पैरामीट्रिक और गैर-पैरामीट्रिक विधियों के साथ आनुवंशिक संरचना के विश्लेषण ने इस बात पर प्रकाश डाला कि एआरओ एक अच्छी तरह से परिभाषित जीन पूल का प्रतिनिधित्व करता है, जो ट्रोपिया और मोंटोरो लैंड्रेस से स्पष्ट रूप से अलग है, जिसके साथ यह अक्सर गलत होता है। आमतौर पर ताजा खपत के लिए उपयोग किए जाने वाले बल्बों का विवरण प्रदान करने के लिए, घुलनशील ठोस सामग्री और तीखेपन का मूल्यांकन किया गया था, जो उपरोक्त दो भूमि के संबंध में एआरओ में उच्च मिठास दिखा रहा है। कुल मिलाकर, वर्तमान अध्ययन एआरओ के भविष्य के मूल्यांकन के लिए उपयोगी है, जिसे गुणवत्ता लेबल के माध्यम से बढ़ावा दिया जा सकता है जो वाणिज्यिक धोखाधड़ी को सीमित करने और छोटे धारकों की आय में सुधार करने में योगदान दे सकता है।
परिचय
एलियम जीनस में लगभग 750 प्रजातियां शामिल हैं [1], जिनमें से प्याज (एलियम सेपा एल।, 2n = 2x = 16) सबसे व्यापक में से एक है। ए। सेपा का द्विवार्षिक चक्र और बहिर्मुखी प्रजनन व्यवहार होता है। आजकल, प्याज का वैश्विक उत्पादन (97.9 मिलियन टन) टमाटर के बाद इसे दूसरी सबसे महत्वपूर्ण सब्जी फसल बनाता है। पुराने समय से, प्याज के बल्बों का उपयोग भोजन और लोक औषधीय अनुप्रयोगों दोनों में किया जाता रहा है। दरअसल, प्राचीन मिस्रवासियों ने पहले से ही 2 ईसा पूर्व, कोडेक्स एबर्स [1550] के एक मेडिकल पेपिरस में लहसुन और प्याज के उपयोग के आधार पर कई चिकित्सीय फ़ार्मुलों की सूचना दी थी।
इस बहुमुखी और स्वस्थ सब्जी का सेवन कच्चा, ताजा या प्रसंस्कृत उत्पाद के रूप में किया जाता है, और कई व्यंजनों के स्वाद को बढ़ाने के लिए उपयोग किया जाता है। हाल के कई अध्ययनों में दावा किया गया है कि प्याज के सेवन से हृदय रोगों [4,5], मोटापा [6], मधुमेह [7] और विभिन्न प्रकार के कैंसर [8-10] के जोखिम को कम किया जा सकता है। प्याज के स्वास्थ्य संबंधी गुणों को अक्सर न्यूट्रास्युटिकल यौगिकों के दो वर्गों के उच्च स्तर के लिए जिम्मेदार ठहराया जाता है: फ्लेवोनोइड्स और एल्क (एन) यल सिस्टीन सल्फ़ोक्साइड्स (एसीएसओ)। प्रथम श्रेणी में फ्लेवोनोल्स और एंथोसायनिन शामिल हैं। क्वेरसेटिन मुख्य पता लगाने योग्य फ्लेवोनोल है, जो मुक्त कट्टरपंथी मैला ढोने और संक्रमण धातु आयनों के बंधन में अपने मजबूत एंटीऑक्सिडेंट और विरोधी भड़काऊ गुणों के लिए जाना जाता है। [11]; जबकि एंथोसायनिन कुछ प्याज किस्मों को लाल/बैंगनी रंग प्रदान करते हैं। एसीएसओ के लिए, सबसे प्रचुर मात्रा में आइसोआलिन है [(+) - ट्रांस-एस-1-प्रोपेनिल-एल-सिस्टीन सल्फोऑक्साइड] [12]कोशिकाओं में जमा एक गैर-वाष्पशील और गैर-प्रोटीनोजेनिक सल्फर अमीनो एसिड, जो प्याज की तीखी सुगंध और स्वाद के लिए अप्रत्यक्ष रूप से जिम्मेदार है। [13]. ऊतक के विघटन पर, आइसोलीन को एंजाइम एलीनेज द्वारा वाष्पशील यौगिकों (पाइरूवेट, अमोनिया, थायोसल्फोनेट और प्रोपेनेथियल एस-ऑक्साइड) की एक श्रृंखला का उत्पादन करने के लिए साफ किया जाता है जो फाड़ को प्रेरित करता है और अप्रिय गंध (तीखापन) का कारण बनता है। [14]. प्याज के तीखेपन को अक्सर हाइड्रोलिसिस द्वारा उत्पन्न पाइरुविक एसिड की मात्रा, प्रति ग्राम ताजा वजन के रूप में मापा जाता है। [15, 16].
भूमध्यसागरीय बेसिन के देशों में, के माध्यमिक विविधता केंद्रों में से एक के रूप में प्रस्तावित A.cepa [17, 18], प्याज के बल्ब आकार, आकार, रंग, शुष्क पदार्थ और तीखेपन में व्यापक परिवर्तनशीलता प्रदर्शित करते हैं [19-22]. इसके अलावा, सल्फर-आधारित निषेचन, कृषि संबंधी अभ्यास, मिट्टी का प्रकार, जलवायु की स्थिति, और खेती या भूमि के जीनोटाइप अजीबोगरीब ऑर्गेनोलेप्टिक और पोषण मूल्यों को प्रदान करके बल्ब की गुणवत्ता को प्रभावित कर सकते हैं। [23-27]. इटली में, व्यापक प्याज जर्मप्लाज्म उपलब्धता के बावजूद, केवल कुछ प्याज किस्मों को वैज्ञानिक अध्ययन के अधीन किया जाता है और ठीक से विशेषता होती है [28, 29].
पादप आनुवंशिक संसाधनों के उचित संरक्षण को सुनिश्चित करने और मूल्य श्रृंखला में विशिष्ट जीनोटाइप के उपयोग को बढ़ावा देने के लिए कृषि-जैव विविधता का पूरी तरह से आनुवंशिक और फेनोटाइपिक लक्षण वर्णन महत्वपूर्ण है। [30-32]. मैपिंग के लिए अक्सर सिंपल सीक्वेंस रिपीट (SSR) मार्करों को चुना गया है [33-35], डीएनए फ़िंगरप्रिंटिंग और कृषक भेदभाव [36-38], और भू-प्रजातियों के भीतर और बीच आनुवंशिक परिवर्तनशीलता का विश्वसनीय अनुमान [39-42], चूंकि वे स्थान विशिष्ट, बहु-युग्मक, कूटप्रधान रूप से विरासत में मिली, अत्यधिक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य, और स्वचालित जीनोटाइपिंग के लिए उपयुक्त हैं।
वर्तमान अध्ययन में, हमने अपना ध्यान एक अपुलीय पारंपरिक भूमि, "एक्वाविवा लाल प्याज" (एआरओ) पर केंद्रित किया, जिसकी खेती बारी प्रांत में एक्वाविवा डेले फोंटी शहर के एक छोटे से क्षेत्र में जैविक खेती के तरीकों के अनुसार की जाती है। (अपुलिया, दक्षिणी इटली)। इस भू-प्रजाति के बल्ब बड़े और चपटे और लाल रंग के होते हैं और बड़े पैमाने पर स्थानीय व्यंजनों में उपयोग किए जाते हैं। हालांकि एआरओ ने "स्लो फूड प्रेसिडियम" गुणवत्ता चिह्न प्राप्त किया, इसके उत्पादन को यूरोपीय संघ गुणवत्ता चिह्नों जैसे संरक्षित भौगोलिक संकेत (पीजीआई) और मूल के संरक्षित पदनाम (पीओडी) द्वारा आगे बढ़ाया और संरक्षित किया जा सकता है, क्योंकि ये सीमित करने में योगदान कर सकते हैं। वाणिज्यिक धोखाधड़ी और छोटे धारकों की आय में सुधार। इस प्रकार, एसएसआर आणविक मार्करों को एआरओ आबादी के बीच आनुवंशिक भिन्नता का आकलन करने के लिए शक्तिशाली उपकरण के रूप में इस्तेमाल किया गया था और इस भूमि को अन्य दो दक्षिणी इतालवी लाल प्याज भूमि से अलग करने के लिए इस्तेमाल किया गया था। इसके अलावा, हमने बाजार की मांग के संबंध में एआरओ स्वाद का मूल्यांकन करने के लिए तीखेपन और घुलनशील ठोस सामग्री का अनुमान लगाया।
परिणाम
एक्वाविवा लाल प्याज जर्मप्लाज्म संग्रह और रूपात्मक विशेषता की स्थापना
एआरओ जर्मप्लाज्म संग्रह स्थापित करने के लिए बायोडाइवरएसओ अपुलिया क्षेत्र परियोजना के ढांचे में किसानों द्वारा दान किए गए एआरओ भूमि की 13 आबादी के बीज का उपयोग किया गया था।
बल्ब, त्वचा और मांस से संबंधित रूपात्मक विवरणक एआरओ जर्मप्लाज्म पर और तीन प्याज भूमि पर एकत्र किए गए थे, दो "ट्रोपिया लाल प्याज" (टीआरओ) लैंड्रेस से संबंधित थे और एक "मोंटोरो कॉपर प्याज" (एमसीओ) लैंड्रेस (चित्रा) से संबंधित था। 1). सभी एआरओ बल्ब सपाट थे और लाल बाहरी त्वचा और लाल रंग के विभिन्न रंगों के साथ मांस की विशेषता थी। इसके विपरीत, टीआरओ बल्ब का मांस पूरी तरह से लाल था, जबकि एमसीओ बल्बों का मांस खराब रूप से रंगा हुआ था (तालिका S1)। जैव रासायनिक विश्लेषण ने ठोस घुलनशील सामग्री और तीखेपन का मूल्यांकन करने की अनुमति दी। जैसा कि तालिका . में बताया गया है 1, ARO आबादी में बल्बों की ठोस घुलनशील सामग्री का औसत मान 7.60 था, और 6.00 (ARO12) से लेकर 9.50° Brix (ARO11 और ARO13) तक था। यह मान टीआरओ और एमसीओ लैंड्रेस (क्रमशः 4.25 और 6.00 डिग्री ब्रिक्स) के लिए अनुमानित अनुमान से अधिक था।
टेबल 1. "एक्वाविवा रेड ओनियन" (एआरओ), "ट्रोपिया रेड ओनियन" (टीआरओ), और "मोंटोरो कॉपर ओनियन" (एमसीओ) आबादी * में ठोस घुलनशील सामग्री और तीखापन मूल्यों का मूल्यांकन किया गया।
कोड | घुलनशील ठोस सामग्री (ब्रिक्स) | तीखापन (pमोलग-1 परिवार कल्याण) | ||
मतलब | CV y (%) | मतलब | CV y (%) | |
ARO1 | 6.25 डी * | 5.65 | 5.84 एबी * | 23.78 |
ARO2 | 7.25 डीसी | 4.87 | 6.51 एक | 22.98 |
ARO3 | 7.50 बीसीडी | 9.42 | 5.28 एबी | 22.88 |
ARO4 | 7.50 बीसीडी | 0.00 | 6.97 एक | 3.74 |
HOOP 5 | 7.50 बीसीडी | 0.00 | 6.80 एक | 9.68 |
ARO6 | 6.25 डी | 5.65 | 4.51 एबी | 39.18 |
ARO7 | 7.25 डीसी | 4.87 | 5.25 एबी | 15.44 |
ARO8 | 9.00 अटल बिहारी | 0.00 | 7.04 एक | 3.49 |
ARO9 | एक्सएनयूएमएक्स एबीसी | 4.28 | 6.84 एक | 0.15 |
ARO10 | 7.00 डीसी | 0.00 | 5.94 एबी | 6.57 |
ARO11 | 9.50 | 7.44 | 5.54 एबी | 16.43 |
ARO12 | 6.00 डी | 0.00 | 4.91 एबी | 9.70 |
ARO13 | 9.50 | 7.44 | 6.63 एक | 24.93 |
संचालन नियंत्रण कार्यालय | 6.00 डी | 0.00 | 4.18 एबी | 2.66 |
टीआरओ1 | 4.25 ई | 8.31 | 2.80 ख | 2.10 |
टीआरओ2 | 4.25 ई | 8.31 | 4.28 एबी | 4.79 |
* मतलब अपरकेस या लोअरकेस में समान अक्षरों वाले क्रमशः 0.01P या 0.05P पर सांख्यिकीय रूप से भिन्न नहीं हैं (एसएनके का टेस्ट)। y विचलन के सह - गुणांक।
पाइरुविक एसिड सामग्री के माध्यम से मूल्यांकन किए गए एआरओ तीखेपन का औसत मूल्य 6.00 था, जो 4.51 पीएमओएल जी से लेकर था।-1 परिवार कल्याण (ARO6) से 7.04 (ARO8)। यह मान TRO और MCO लैंड्रेस में अनुमानित मूल्य (3.54 pmol g .) से अधिक था-1 परिवार कल्याण और 4.18 पीएमओएल जी-1 एफडब्ल्यू, क्रमशः)।
एसएसआर बहुरूपता और परिग्रहणों के बीच आनुवंशिक संबंध
वर्तमान अध्ययन में, 11 परीक्षण किए गए एसएसआर प्राइमर संयोजनों में से 37 ने एकल-लोकस बहुरूपता प्रदान की, यानी, एक व्यक्ति में अधिकतम दो प्रवर्धन उत्पादों की उपज। कुल मिलाकर, 55 व्यक्तियों में 320 (एसीएम2 और एसीएम 147) से लेकर 504 (एसीएम11) तक और 132 एलील (तालिका) के औसत मूल्य के साथ 5 व्यक्तियों में XNUMX एलील पाए गए। 2). व्यक्तिगत आबादी में, एलील्स (Na) की संख्या 1.94 (ACM147 और ACM504) से लेकर 5.38 (ACM132) तक थी, जबकि एलील्स (Ne) की प्रभावी संख्या 1.41 (ACM152) से लेकर 2.82 (ACM449) तक थी। विसंगतियों Na और Ne मानों के बीच जनसंख्या में कम आवृत्ति वाले एलील्स की उपस्थिति और केवल कुछ एलील्स की प्रबलता के कारण थे। ACM138 और ACM449 (0.62) के लिए उच्चतम देखे गए हेटेरोज़ायोसिटी (Ho) मान को हाइलाइट किया गया था, जबकि सबसे कम ACM152 (0.25) के साथ जुड़ा था। अपेक्षित हेटेरोज़ायोसिटी (हे), जो एक पैनमिक्टिक आबादी में सैद्धांतिक अपेक्षा से मेल खाती है, 0.37 (ACM504) से 0.61 (ACM132, ACM138, और ACM449) तक थी। राइट्स फिक्सेशन इंडेक्स (Fis), सभी मार्करों के लिए शून्य (औसत 0.05) के करीब मान प्रदर्शित करता है, जो एक आउटक्रॉसिंग प्रजाति के लिए अपेक्षित और अपेक्षित हेटेरोज़ायोसिटी स्तरों के बीच समान मूल्यों को दर्शाता है। आनुवंशिक फ़िंगरप्रिंटिंग में व्यक्तिगत SSR मार्कर की दक्षता का अनुमान बहुरूपी सूचना सामग्री (PIC) सूचकांक द्वारा लगाया गया था, जिसका औसत मान 0.48 था और 0.33 (ACM504) से 0.67 (ACM132) तक था। एक अन्य दक्षता सूचकांक, शैनन की सूचना सूचकांक (आई) ने 0.84 का औसत मूल्य प्रदर्शित किया, और मान लिया गया मान 0.45 (एसीएम152) से 1.20 (एसीएम132) तक था।
टेबल 2. बहुरूपता एआरओ, टीआरओ और एमसीओ आबादी में आनुवंशिक विविधता का अनुमान लगाने के लिए प्रयुक्त 11 एसएसआर मार्करों की विशेषताएं। एलील्स की कुल संख्या (Na), बैंड साइज रेंज, और पॉलीमॉर्फिक इंफॉर्मेशन कंटेंट (PIC) इंडेक्स इस अध्ययन में जीनोटाइप किए गए 320 व्यक्तियों के कुल सेट को संदर्भित करता है। एलील्स की संख्या (Na), प्रभावी एलील्स की संख्या (Ne), ऑब्जर्व्ड हेटेरोज़ायोसिटी (हो), एक्सपेक्टेड हेटेरोज़ायोसिटी (He), फिक्सेशन इंडेक्स (F)is), और शैनन का सूचना सूचकांक (I) 16 जनसंख्या से परिकलित माध्य मानों को संदर्भित करता है, प्रत्येक 20 व्यक्तियों द्वारा रचित।
ठिकाना। | कुल ना | आकार सीमा (बीपी) | तस्वीर | मतलब | |||||
Na | Ne | Ho | He | I | Fis | ||||
ACM91 | 4 | 189-205 | 0.40 | 2.63 | 1.72 | 0.38 | 0.39 | 0.66 | 0.04 |
ACM101 | 4 | 229-241 | 0.52 | 2.94 | 2.37 | 0.53 | 0.56 | 0.92 | 0.06 |
ACM132 | 11 | 186-248 | 0.67 | 5.38 | 2.78 | 0.55 | 0.61 | 1.20 | 0.09 |
ACM138 | 5 | 242-272 | 0.66 | 3.69 | 2.82 | 0.62 | 0.61 | 1.09 | -0.02 |
ACM147 | 2 | 264-266 | 0.37 | 1.94 | 1.83 | 0.44 | 0.44 | 0.62 | -0.01 |
ACM152 | 4 | 228-244 | 0.25 | 2.38 | 1.41 | 0.25 | 0.27 | 0.45 | 0.07 |
ACM235 | 4 | 286-298 | 0.41 | 2.81 | 1.77 | 0.44 | 0.41 | 0.72 | -0.06 |
ACM446 | 6 | 108-120 | 0.56 | 3.50 | 2.48 | 0.49 | 0.58 | 1.01 | 0.16 |
ACM449 | 8 | 120-140 | 0.66 | 4.88 | 2.82 | 0.62 | 0.61 | 1.18 | -0.03 |
ACM463 | 5 | 202-210 | 0.47 | 3.38 | 1.95 | 0.46 | 0.48 | 0.83 | 0.05 |
ACM504 | 2 | 188-192 | 0.33 | 1.94 | 1.64 | 0.30 | 0.37 | 0.54 | 0.20 |
मतलब | 5 | 0.48 | 3.22 | 2.15 | 0.46 | 0.48 | 0.84 | 0.05 |
आबादी के बीच, ARO3, ARO6, ARO8, ARO10, TRO1, और MCO ने उच्च स्तर की आनुवंशिक भिन्नता (Ho> 0.5) प्रदर्शित की, जबकि सबसे कम विविधता जनसंख्या ARO7 (Ho = 0.27) (पूरक तालिका S2) में देखी गई। कुल मिलाकर, सभी परिग्रहणों ने F . प्रदर्शित कियाis शून्य के करीब मान (Fis माध्य मान = 0.054), जैसा कि यादृच्छिक संभोग स्थितियों के तहत अपेक्षित है।
आणविक भिन्नता और आनुवंशिक संरचना का विश्लेषण
आबादी के बीच और भीतर आनुवंशिक भिन्नता के पदानुक्रमित विभाजन की गणना AMOVA द्वारा की गई थी। परिणामों ने आबादी (87%) के भीतर आनुवंशिक भिन्नता के काफी अंश पर प्रकाश डाला। आबादी के बीच भिन्नता, 13%, अत्यधिक महत्वपूर्ण थी (P <0.001) (तालिका 3). Fpt पैरामीटर के जोड़ीवार मान, राइट के Fst निर्धारण सूचकांक के अनुरूप, 0.002 (ARO2/ARO10) से 0.468 (ARO7/TRO2) तक, महत्वपूर्ण थे (P <0.05), नौ जोड़ीदार तुलनाओं को छोड़कर (पूरक तालिका S3)।
टेबल 3. की 320 आबादी से 16 जीनोटाइप के आणविक प्रसरण का विश्लेषण अल्लियम सेपा L.
स्रोत | df | वर्गों का योग | प्रसरण अनुमान | भिन्नता (%) | Fpt | P |
आबादी के बीच | 15 | 458.63 | 1.16 | 13% तक | ||
आबादी के भीतर | 304 | 2272.99 | 7.50 | 87% तक | 0.134 | 0.001 |
कुल | 319 | 2731.62 | 8.66 |
में आनुवंशिक संरचना की जांच A.cepa इस अध्ययन में संग्रह जीनोटाइप को सॉफ्टवेयर संरचना में लागू किए गए मिश्रण मॉडल-आधारित क्लस्टरिंग विश्लेषण के माध्यम से किया गया था। इवानो एके पद्धति ने हमारे लिए सबसे अधिक जानकारीपूर्ण के रूप में दो समूहों (के = 2) में उपखंड का सुझाव दिया डाटासेट,वें के साथe अगला उच्चतम पेके पर एके = 5 (सप्लीमेंटाइव रगरे एस 1). एक कांटा = 2, aअश्वशक्तिopनियमअरे गधेigned से ओnऔरf दो क्लस्टर साथ में a rnnerbertoip गुणांक (q) > 0.7। के रूप मेंhoमें जीतना आकृति 2a, पहले क्लस्टर (S1 नाम दिया गया) में MCO और सभी ARO आबादी शामिल थी, जबकि S2 क्लस्टर ने दो TRO आबादी को समूहीकृत किया। K = 5 पर, डेटासेट का गहरा विवरण प्रदान करना (चित्र 2b), 75% परिग्रहण पांच समूहों में से एक को सौंपे गए थे। ARO (S1) और TRO (S2) के बीच अलगाव की पुष्टि की गई थी, हालांकि कुछ ARO आबादी को दो नए समूहों S0.7 और S3 (ARO4 और ARO7, क्रमशः) में अलग-अलग (q <12) या अलग-अलग समूहीकृत किया गया था। दिलचस्प बात यह है कि MCO वाणिज्यिक प्रकार ने अपुलीयन लाल प्याज से अलग एक अलग क्लस्टर (S5) का गठन किया।
आबादी के बीच आनुवंशिक संबंध
SSR बहुरूपता ने आनुवंशिक विविधता का एक डेंड्रोग्राम बनाने की अनुमति दी और फ़ाइलोजेनेटिक विश्लेषण के परिणाम चित्र में दिखाए गए हैं 3a. यहां, बूटस्ट्रैप मूल्यों द्वारा दृढ़ता से समर्थित जर्मप्लाज्म संग्रह को पांच समूहों में विभाजित किया गया था। ARO7 और ARO12 आबादी को तुरंत शेष आबादी से अलग कर दिया गया और दो अलग-अलग समूहों का गठन किया। तीसरे क्लस्टर में टीआरओ की दो व्यावसायिक आबादी शामिल थी, इस बीच चौथे नोड ने एमसीओ को ग्यारह एआरओ आबादी से विभाजित किया। प्रमुख समन्वय विश्लेषण (पीसीओए) (चित्रा .) के माध्यम से आबादी के बीच होने वाले आनुवंशिक संबंधों की और जांच की गई 3b) जैसा कि पहले प्रकाश डाला गया था, ARO12 और ARO7 को छोड़कर, ARO आबादी को कसकर समूहीकृत किया गया था, जो PCoA प्लॉट में अलग-थलग स्थिति में दिखाई दिए। दो टीआरओ और एमसीओ आबादी भूखंड के निचले-दाएं पैनल में बिखरी हुई थी।
चित्रा 3। 16 . के बीच आनुवंशिक विविधता A.cepa इस अध्ययन में उनके एसएसआर प्रोफाइल के आधार पर आबादी की विशेषता है। (a) आनुवंशिक दूरी का UPGMA डेंड्रोग्राम। बूटस्ट्रैप समर्थन मान> 50 संबंधित नोड्स के ऊपर इंगित किए गए हैं; (b) प्रमुख घटक विश्लेषण (पीसीओए)। लाल रंग में परिचालित क्लस्टर पूरी तरह से फ़ाइलोजेनेटिक विश्लेषण द्वारा उत्पन्न समूह के साथ मेल खाता है और 11 एआरओ परिग्रहणों द्वारा गठित किया गया है।
चर्चा
दक्षिणी इटली में पारंपरिक रूप से खेती की जाने वाली कृषि-जैव विविधता की बड़ी मात्रा के भीतर, प्याज की भूमि विशिष्ट उत्पादों का प्रतिनिधित्व करती है जिन्हें आनुवंशिक क्षरण के जोखिम और आधुनिक किस्मों द्वारा प्रतिस्थापन के खतरे से संरक्षित करने की आवश्यकता होती है। क्षेत्रीय परियोजना बायोडाइवरएसओ के ढांचे में, स्थानीय विरासत से मजबूती से जुड़े अपुलिया क्षेत्र के आनुवंशिक संसाधनों को एकत्रित करने, चिह्नित करने, बढ़ावा देने और उनकी सुरक्षा करने के उद्देश्य से, हमने एआरओ लैंड्रेस की 13 आबादी का एक बीज संग्रह स्थापित किया। हमने डीएनए बहुरूपता और दो जैव रासायनिक मापदंडों, घुलनशील ठोस और पाइरुविक एसिड सामग्री के संदर्भ में एआरओ भिन्नता के पहले मूल्यांकन की सूचना दी, जो स्वाद के लक्षणों से संबंधित है और ताजा कच्चे उत्पादों की स्वीकृति के लिए महत्व है। इसके अलावा, एआरओ लैंड्रेस के डेटा की तुलना दो अन्य पिगमेंटेड प्याज लैंड्रेस पर एकत्र किए गए डेटा से की गई थी, जिसके साथ इसे अक्सर गलत माना जाता था।
मीठे प्याज उद्योग के दिशानिर्देशों के अनुसार, जैव रासायनिक विश्लेषणों ने उच्च घुलनशील ठोस सामग्री और मध्यम तीखेपन से संबंधित 13 एआरओ आबादी की मिठास पर प्रकाश डाला। [31]. एआरओ बल्ब टीआरओ और एमसीओ लैंडरेस की तुलना में अधिक मीठे थे, और थोड़ा अधिक तीखापन प्रदर्शित करते थे। हालांकि, प्याज में मिठास चीनी सामग्री और तीखेपन के बीच संतुलन के कारण होती है, इसलिए यह लक्षण वर्णन मूल्य के जीनोटाइप के चयन का समर्थन करने के लिए उपयोगी हो सकता है, आमतौर पर किसानों द्वारा केवल आकारिकी के आधार पर किया जाता है।
एसएसआर मार्करों को जीनोटाइप में भेदभाव करने के लिए एक उपयोगी उपकरण के रूप में पुष्टि की गई थी, यद्यपि एक्वाविवा डेल्ले फोंटी शहर जैसे एक संकीर्ण बढ़ते क्षेत्र के भीतर एकत्र किया गया था। चयनित मार्करों ने पहले रिपोर्ट किए गए मार्करों की तुलना में अधिक संख्या में एलील प्रदर्शित किए [43] और [44], लेकिन द्वारा रिपोर्ट किए गए मार्करों से कम [45]. इसके अलावा, हमारे मार्करों के 50% ने पीआईसी सूचकांक मूल्यों को 0.5 से अधिक दिखाया, जो संग्रह में आबादी में भेदभाव करने के लिए उपयुक्त साबित हुआ, जैसा कि सुझाव दिया गया है [46]. आबादी के भीतर विविधता के आकलन से हो और हे के बीच समान मूल्यों का पता चला, जिसके परिणामस्वरूप कम Fis मूल्य। यह आउट-क्रॉसिंग प्रकृति के साथ समझौता है ए सेपा, जो गंभीर रूप से अंतर्गर्भाशयी अवसाद से ग्रस्त है [47]. कुल मिलाकर Fis इस अध्ययन (0.054) में माना गया प्याज की आबादी में परिकलित मूल्य, पहले की रिपोर्ट की तुलना में कम था [45] (0.22) और द्वारा पाए गए लगभग समान [31] (0.08) और [48] (0.00) जिन्होंने क्रमशः उत्तर पश्चिमी स्पेन और नाइजर से प्याज की भूमि में आनुवंशिक विविधता का आकलन किया। एआरओ आबादी में विषमयुग्मजीता के उल्लेखनीय स्तर इस धारणा को पुष्ट करते हैं कि अपुलिया कई बागवानी प्रजातियों के लिए एक विविधता केंद्र का प्रतिनिधित्व करता है। [32, 42, 49-51].
AMOVA ने इस बात पर प्रकाश डाला कि इस अध्ययन में जीनोटाइप किए गए संग्रह में अधिकांश आणविक भिन्नता आबादी के भीतर है। हालांकि, आबादी के बीच महत्वपूर्ण आनुवंशिक भेदभाव (F .)PT मूल्यों) ने आनुवंशिक स्तरीकरण की घटना का खुलासा किया। वास्तव में, हालांकि हमारे परिणामों ने अधिकांश एआरओ आबादी में आनुवंशिक एकरूपता की उपस्थिति का संकेत दिया, एक अच्छी तरह से परिभाषित क्लस्टर बनाने के लिए, एआरओ 7 और एआरओ 12 आबादी ने स्पष्ट रूप से अलग आनुवंशिक प्रोफ़ाइल प्रदर्शित की। यह परिणाम दो किसानों द्वारा इस्तेमाल किए गए बीजों की एक अलग उत्पत्ति के कारण हो सकता है, जिससे आबादी एकत्र की गई थी। इसके अलावा, प्राप्त परिणामों के आधार पर, एआरओ लैंड्रेस को टीआरओ और एमसीओ लैंड्रेस से आनुवंशिक स्तर पर स्पष्ट रूप से अलग माना जा सकता है। हाल के एक अध्ययन में, [29] "एक्वाविवा," "ट्रोपिया," और "मोंटोरो" सहित कई इतालवी प्याज भूमि की आनुवंशिक विविधता का आकलन किया। हालांकि लेखकों ने व्यापक प्याज संग्रह की आनुवंशिक विविधता का आकलन करने के लिए एसएनपी मार्करों का उपयोग किया, जीनोटाइपिंग "ट्रोपिया" और "मोंटोरो" प्याज से "एक्वाविवा" में भेदभाव करने में सक्षम नहीं था। संभवतः, यह विसंगति निम्न माध्य PIC मान (0.292) के कारण है, जो विश्लेषण के तहत लोकी की एक सामान्य सामान्य सूचनात्मकता का सुझाव देता है जैसा कि दावा किया गया है [29]. इसके अलावा, उनके इतालवी क्लस्टर में उप-संरचना की उपस्थिति की जांच करने के लिए, बाकी संग्रह से अलग से इतालवी जीनोटाइप का विश्लेषण करना बेहतर होगा। संभवतः इसने भौगोलिक स्तरीकरण या अनुभवजन्य चयन के तहत लक्षणों से जुड़ी आनुवंशिक विविधता के पैटर्न की कल्पना करने की अनुमति दी होगी।
अंत में, वर्तमान अध्ययन स्थानीय सांस्कृतिक विरासत और किसानों के लिए आर्थिक महत्व से जुड़ी एक प्याज भूमि पर एक व्यापक रिपोर्ट का प्रतिनिधित्व करता है। हमारे परिणाम इस बात पर प्रकाश डालते हैं कि, कुछ अपवादों के साथ, एआरओ को एक अच्छी तरह से परिभाषित जीन पूल की विशेषता है, जो आनुवंशिक क्षरण के जोखिम से संरक्षित होने के योग्य है। इसलिए, आनुवंशिक विविधता के इस मूल्यवान स्रोत के प्रतिनिधि संग्रह की स्थापना महत्वपूर्ण रही है। अंत में, एआरओ का आनुवंशिक और फेनोटाइपिक लक्षण वर्णन यूरोपीय संघ से गुणवत्ता अंक प्राप्त करने के लिए उपयोगी हो सकता है।
सामग्री और तरीके
जर्मप्लाज्म संग्रह, पादप सामग्री, और डीएनए निष्कर्षण
एआरओ लैंड्रेस की 13 आबादी का एक समूह अपुलीया क्षेत्र परियोजना के ढांचे के भीतर हासिल किया गया था (बायोडायवर्स एसओ: https://www.biodiversitapuglia.it/), इटली के बारी प्रांत के एक छोटे से अपुलीयन शहर "एक्वाविवा डेले फोंटी" में किए गए मिशनों की एक श्रृंखला के माध्यम से। भौगोलिक सूचना प्रणाली (जीआईएस) के माध्यम से प्रत्येक परिग्रहण के संग्रह स्थलों को मैप किया गया और तालिका . में रिपोर्ट किया गया 4. इसके अलावा, टीआरओ लैंड्रेस से दो आबादी और एमसीओ लैंड्रेस की एक आबादी को वर्तमान अध्ययन में शामिल किया गया था और संदर्भ के रूप में इस्तेमाल किया गया था। सभी पौधों की सामग्री को समान पर्यावरणीय परिस्थितियों में बारी विश्वविद्यालय के प्रायोगिक फार्म "पी मार्टुची" (41° 1'22.08' N, 16° 54'25.95' E) में उगाया गया था। आबादी और ब्लोफ्लाइज़ के माध्यम से अंतर-जनसंख्या परागण का आश्वासन (लूसिलिया सीज़र)। 16 आबादी को बल्ब के आकार और आकार और त्वचा और मांस के रंग (तालिका S1) से संबंधित लक्षणों की विशेषता थी। इसके अलावा, ठोस घुलनशील सामग्री परख एक हाथ से पकड़े हुए रेफ्रेक्टोमीटर का उपयोग करके किया गया था और प्याज के रस के नमूनों में 2,4-डाइनिट्रोफिनाइल हाइड्राज़िन (0.125%) जोड़कर तीखापन मापा गया था। v/v एचसीएल के 2एन में) और 420 एनएम पर अवशोषण का मूल्यांकन, जैसा कि रिपोर्ट किया गया है [31]. डंकन के बहु-श्रेणी परीक्षण और एसएनके परीक्षण महत्वपूर्ण अंतरों की उपस्थिति का निर्धारण करने के लिए किए गए थे।
टेबल 4. इस अध्ययन में एकत्रित और जीनोटाइप की गई जनसंख्या की सूची। प्रत्येक जनसंख्या के लिए, पहचान कोड, स्थानीय नाम, जीपीएस कोऑर्डिनेट, और जीन बैंक द्वारा बीजों को संरक्षित करने की सूचना दी जाती है।
कोड | नाम | जीपीएस निर्देशांक | जीन बैंक y |
ARO1 | सिपोला रोसा डि एक्वाविवा | 40°54’21.708″ N 16°49’1.631” E | दी.एसएसपीए |
ARO2 | सिपोला रोसा डि एक्वाविवा | 40°53’14.28″ N 16°48’56.879” E | दी.एसएसपीए |
ARO3 | सिपोला रोसा डि एक्वाविवा | 40°54’11.304″ N 16°49’13.079” E | दी.एसएसपीए |
ARO4 | सिपोला रोसा डि एक्वाविवा | 40°54’3.348″ N 16°40’27.011” E | दी.एसएसपीए |
ARO5 | सिपोला रोसा डि एक्वाविवा | 40°51’59.76″ N 16°53’0.527” E | दी.एसएसपीए |
ARO6 | सिपोला रोसा डि एक्वाविवा | 40°52’48.72″ N 16°49’43.247” E | दी.एसएसपीए |
ARO7 | सिपोला रोसा डि एक्वाविवा | 40°53’13.47″ N 16°50’23.783” E | दी.एसएसपीए |
ARO8 | सिपोला रोसा डि एक्वाविवा | 40°53’18.816″ N 16°49’33.888” E | दी.एसएसपीए |
ARO9 | सिपोला रोसा डि एक्वाविवा | 40°54'51.372″ एन 16°49'3.504" E | दी.एसएसपीए |
ARO10 | सिपोला रोसा डि एक्वाविवा | 40°54’1.188″ N 16°49’24.311” E | दी.एसएसपीए |
ARO11 | सिपोला रोसा डि एक्वाविवा | 40°52'49.8″ एन 16°49'48.575" E | दी.एसएसपीए |
ARO12 | सिपोला रोसा डि एक्वाविवा | 40°52’38.892″ N 16°49’28.379” E | दी.एसएसपीए |
ARO13 | सिपोला रोसा डि एक्वाविवा | 40°53’21.768″ N 16°49’29.711” E | दी.एसएसपीए |
टीआरओ1 | सिपोला रोसा लुंगा डि ट्रोपिया | - | दी.एसएसपीए |
टीआरओ2 | सिपोला रोसा टोंडा डि ट्रोपिया | - | दी.एसएसपीए |
संचालन नियंत्रण कार्यालय | सिपोला रमाता डी मोंटोरो | - | दी.एसएसपीए |
y Di.SSPA, मृदा, पादप और खाद्य विज्ञान विभाग, बारी विश्वविद्यालय। |
प्रति जनसंख्या 20 जीनोटाइप की पत्ती सामग्री का नमूना लिया गया और उपयोग होने तक -80 डिग्री सेल्सियस पर संग्रहीत किया गया। पॉलीसेकेराइड युक्त प्रजातियों के लिए, जैसे ए सेपा, पॉलीसेकेराइड को हटाने के पहले चरण अच्छी गुणवत्ता वाले डीएनए प्राप्त करने के लिए आवश्यक हैं, इसलिए एसटीई बफर (0.25 एम सुक्रोज, 0.03 एम ट्रिस, 0.05 एम ईडीटीए) में प्रारंभिक washes द्वारा वर्णित के रूप में प्रदर्शन किया गया था [52]. सीटीएबी पद्धति के बाद कुल डीएनए निकाला गया था [53] और अंत में नैनो ड्रॉप 2000 यूवी-विज़ स्पेक्ट्रोफोटोमीटर (थर्मोसाइंटिफिक, वॉलथम, एमए, यूएसए) और 0.8% agarose gel वैद्युतकणसंचलन द्वारा गुणवत्ता और एकाग्रता के लिए जाँच की गई।
एसएसआर विश्लेषण
द्वारा विकसित 16 ईएसटी-एसएसआर प्राइमर संयोजन [54] और पहले आनुवंशिक विविधता अध्ययनों में परीक्षण किया गया था [43] और [44] और 21 जीनोमिक एसएसआर [45-55] उनकी उपयुक्तता का मूल्यांकन करने के लिए जांच की गई (पूरक तालिका S4)। आर्थिक फ्लोरोसेंट टैगिंग पद्धति का उपयोग करके जीनोटाइपिंग का प्रदर्शन किया गया था जिसमें M13 पूंछ को प्रत्येक आगे SSR प्राइमर में जोड़ा जाता है [56]. पीसीआर मिक्स 20 जीएल रिएक्शन में तैयार किए गए थे: कुल डीएनए का 50 एनजी, डीएनटीपी मिक्स का 0.2 एमएम, पीसीआर रिएक्शन बफर का 1 एक्स, ड्रीमटैक डीएनए पोलीमरेज़ का 0.8 यू (थर्मो साइंटिफिक, वॉलथम, एमए, यूएसए), 0.16 ग्राम रिवर्स प्राइमर , 0.032 ग्राम फॉरवर्ड प्राइमर M13 अनुक्रम (5′-TGTAAAACGACGGCCAGT-3′) और FAM या NED फ्लोरोसेंट डाई (सिग्मा-एल्ड्रिच, सेंट लुइस, एमओ, यूएसए) के साथ लेबल किए गए सार्वभौमिक M0.08 प्राइमर के 13 ग्राम के साथ बढ़ाया गया। पीसीआर प्रतिक्रियाओं को सिम्पलीएम्प (एप्लाइड बायोसिस्टम्स, सीए, यूएसए) थर्मोसायकलर में प्राइमर जोड़े के बहुमत के लिए निम्नलिखित शर्तों के साथ किया गया था: 94 मिनट के लिए 5 डिग्री सेल्सियस, 40 एस के लिए 94 डिग्री सेल्सियस पर 30 चक्र, 58 डिग्री सेल्सियस 45 एस और 72 डिग्री सेल्सियस के लिए 45 एस और 72 डिग्री सेल्सियस पर 5 मिनट के लिए एक अंतिम बढ़ाव के लिए । ACM446 और ACM449 के लिए, एक टचडाउन पीसीआर को 60 डिग्री सेल्सियस से 55 डिग्री सेल्सियस पर 10 चक्रों, 30 चक्रों को 55 डिग्री सेल्सियस पर, इसके बाद 5 डिग्री सेल्सियस पर 72 मिनट के अंतिम विस्तार के साथ लागू किया गया था। पीसीआर उत्पादों को 96-वेल प्लेट में लोड किया गया और 14 जीएल हाई-डी फॉर्मामाइड (लाइफ टेक्नोलॉजीज, कार्ल्सबैड, सीए, यूएसए) और 0.5 जीएल जीनस्कैन 500 आरओएक्स साइज स्टैंडर्ड (लाइफ टेक्नोलॉजीज, कार्ल्सबैड, सीए, यूएसए) के साथ मिलाया गया। एम्पलीकॉन्स को एबीआई प्रिज्म 3100 अवंत जेनेटिक एनालाइज़र (लाइफ टेक्नोलॉजीज, कार्ल्सबैड, सीए, यूएसए) केशिका अनुक्रमण मशीन के माध्यम से हल किया गया था, जहां एलील्स को सह-प्रमुख के रूप में स्कोर किया गया था और जीनमैपर सॉफ्टवेयर संस्करण 3.7 का उपयोग करके सौंपा गया था।
सॉफ्टवेयर GenAlEx 6.5 [57] और सर्वस 3.0.7 [58] एलील्स की संख्या (Na), प्रभावी एलील्स की संख्या (Ne), प्रेक्षित हेटेरोज़ायोसिटी (Ho), अपेक्षित हेटेरोज़ायोसिटी (He), बहुरूपी सूचना सामग्री (PIC), शैनन की सूचना सूचकांक (I), और निर्धारण सूचकांक (Fis) का अनुमान लगाने के लिए उपयोग किया गया था। ) प्रत्येक SSR ठिकाने के लिए।
आनुवंशिक विविधता का आकलन
GenAlEx 6.5 . द्वारा प्याज की आबादी के बीच और भीतर आनुवंशिक भिन्नता के पदानुक्रमित विभाजन का मूल्यांकन किया गया था [57] महत्व के परीक्षण के लिए 999 बूटस्ट्रैपिंग के साथ आणविक विचरण (AMOVA) के विश्लेषण के माध्यम से। इसके अलावा, GenAlEx 6.5 सॉफ़्टवेयर का उपयोग सभी SSR लोकी पर Ho, He और Fi के औसत की गणना करके प्रत्येक जनसंख्या के भीतर विविधता का अनुमान लगाने के लिए किया गया था।
जनसंख्या संरचना का अनुमान STRUCTURE v.2.3.4 सॉफ़्टवेयर में कार्यान्वित बायेसियन मॉडल-आधारित क्लस्टरिंग एल्गोरिथम द्वारा लगाया गया था। [59]. डेटा सेट को 1 से 10 तक के कई काल्पनिक समूहों (K) के साथ चलाया गया था, प्रत्येक K मान के लिए दस स्वतंत्र रन निर्धारित किए गए थे। प्रत्येक रन के लिए, परिणामों की निरंतरता को सत्यापित करने के उद्देश्य से, 100,000 प्रारंभिक बर्न-इन अवधि और 100,000 मार्कोव चेन मोंटे कार्लो (एमसीएमसी) पुनरावृत्तियों को आबादी के बीच मिश्रण मॉडल और स्वतंत्र एलील आवृत्तियों के तहत किया गया था। सबसे अधिक संभावित K मान AK विधि को लागू करके निर्धारित किया गया था, जिसका वर्णन द्वारा किया गया है [60], वेब आधारित कार्यक्रम स्ट्रक्चर हार्वेस्टर में [61]. एक व्यक्तिगत आबादी को एक विशिष्ट क्लस्टर को सौंपा गया था जब इसकी सदस्यता गुणांक (क्यू-मान) 0.7 से अधिक था, अन्यथा इसे मिश्रित वंश के रूप में माना जाता था।
नी की आनुवंशिक दूरी मैट्रिक्स (पूरक तालिका S5) द्वारा प्रकट किए गए परिग्रहणों के बीच आनुवंशिक संबंध के पैटर्न की कल्पना करने के लिए प्रधान समन्वय विश्लेषण किया गया था। एलील फ़्रीक्वेंसी के आधार पर, POPTREW सॉफ़्टवेयर में अंकगणितीय औसत (UPGMA) क्लस्टर विश्लेषण के साथ अनवीटेड पेयर ग्रुप मेथड को लागू करते हुए आनुवंशिक दूरी का एक डेंड्रोग्राम बनाया गया था। [62]. पदानुक्रमित क्लस्टरिंग में विश्वास का आकलन करने के लिए बूटस्ट्रैपिंग को लागू किया गया था, डेटा सेट के 100 पुन: नमूनाकरण की स्थापना की गई थी। अंत में, मेगा एक्स सॉफ्टवेयर [63] ट्री ड्राइंग सॉफ्टवेयर के रूप में इस्तेमाल किया गया था।
सम्पूरक चीजें: निम्नलिखित ऑनलाइन उपलब्ध हैं http://www.mdpi.com/2223-7747/9/2/260/s1. तालिका S1: ARO, MCO और TRO बल्बों का रूपात्मक लक्षण वर्णन। तालिका S2: एआरओ लैंड्रेस और टीआरओ और एमसीओ लैंड्रेस के लिए गणना किए गए हेटेरोज़ायोसिटी और फिक्सेशन इंडेक्स। तालिका S3: Fpt पैरामीटर के जोड़ीवार मान। तालिका S4: अध्ययन में प्रयुक्त SSR की सूची। तालिका S5। नी आनुवंशिक दूरी की जोड़ीदार जनसंख्या मैट्रिक्स। चित्र S1: Evanno के डेल्टा K के साथ बदलते K मानों का रेखा चार्ट।
लेखक योगदान: सीएल और एलआर ने अध्ययन की कल्पना की और प्रयोग को डिजाइन किया; सीएल और पीआई ने आणविक मार्कर विश्लेषण किया; एआरएम और वीजेड ने फील्ड परीक्षण किया; आरएम, एसपी, जीआर और सीएल डेटा विश्लेषण में शामिल थे; आरएम और सीएल ने पांडुलिपि लिखी। सभी लेखकों ने पांडुलिपि के प्रकाशित संस्करण को पढ़ लिया है और सहमत हैं।
अनुदान: इस काम को क्षेत्रीय अपुलीयन परियोजना "अपुलीयन सब्जी प्रजातियों की जैव विविधता" द्वारा वित्त पोषित किया गया था -प्रोग्रामा डि स्विलुप्पो रूरल प्रति ला पुगलिया 2014-2020। मिसुरा 10—सोटोमिसुर 10.2; अनुदान CUP H92C15000270002, इटली।
स्वीकृतियाँ: प्रयोग में प्रयुक्त पादप सामग्री प्रदान करने के लिए "एज़िंडा एग्रीकोला इयानोन अन्ना" और "एसोसिएज़ियोन प्रोडुटोरी डेला वेरा सिपोला रोसा डि एक्वाविवा" के कारण आभार व्यक्त किया गया है।
हितों का टकराव: ऑथर ने किसी हित संघर्ष की घोषणा नहीं की है।
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